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医药医学类
黄连及其制剂中生物碱化合物的HPLC测定概述(二)
1、薄层色谱扫描法
薄层色谱扫描法是指一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层进行扫描,测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后产生的荧光强度。所得到的图谱及积分数据可用于药品的鉴别、检查及含量测定。
薄层色谱扫描法测定胡黄连苷的含量测定方法。方法:采用双波长薄层色谱扫描法。结果胡黄连苷在0.605~3.025ug范围内呈良好的显性关系,平均回收率98.37%,RSD=1.90%.结论:本方法操作简单,结果准确,精密度好。
2、紫外分光光度法
紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度,用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时,物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此,通过测定物质在不同波长处的吸光度,并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。
紫外线分光光度法测定黄连中盐酸小檗碱的含量。方法:应用紫外分光光度法测定含量。结果:盐酸小檗碱在浓度为0.002mg/ml~0.010mg/ml范围内,浓度与吸光度呈现良好的线性关系,结论:此法操作简单,结果准确,精密度好。
3、高效液相色谱法
高效液相色谱法又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同及性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对式样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用
测定黄连中盐酸小檗碱含量,用耐酸性ZOBAXEclipseXDB-C8色谱柱,在较低PH下,以乙腈-0 5mol磷酸二氢钠(磷酸调PH为25)(30:70)为流动相,于345你nm处测定。结果显示盐酸小檗碱平均回收率为99 31%。此法简便快速,重现性好成本低。
三、黄连中生物碱化合物的高效液相色谱法分析
目的:利用高效液相色谱-质谱法,对黄连药材中的化学成分进行定性研究并对主要成分进行定量研究。
方法:采用Waters Symmetry C18(3.9 mm×150 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈和0.05%甲酸水梯度洗脱;检测波长345 nm;流速为0.8 mL/min;柱温35℃;正离子检测模式;电喷雾离子化(ESI)。
结果:鉴定了8个成分分别为木兰花碱、格陵兰黄连碱、黄连碱、表小檗碱、非洲防己碱、药根碱、小檗碱和巴马汀;同时对小檗碱、药根碱、黄连碱和巴马汀进行了含量测定。
结论:该方法简便、准确,可用于黄连药材的质量评价。
四、含黄连制剂中生物碱类化合物的HPLC测定实例
(一)HPLC法测定万氏牛黄清心丸中小檗碱型生物碱的含量研究
用HPLC法分离并测定了万氏牛黄清心丸中小檗碱、巴马汀、药根碱和黄连碱的含量。采用硅胶色谱柱,以无水乙醇-3%三乙胺(92:8)为流动相,检测波长345nm。实验结果样品中各组份的分离度好,四种生物碱的标准曲线的相关系数分别为0.9999,0.9998,0.9996和0.9994,回收率分别为99.69%±1.20%,98.38%±1.54%,95.27%±1.83%和96.32%±2.01%
(二)HPLC法测定黄连上清片中黄连素的含量的研究
采用反相高效液相色谱法,对黄连上清片中黄连素的含量进行测定。方法简便,其它组分对测定无干扰,重现性好,可用于该制剂的质量控制。测定结果,平均加样回收率为99.87±0.7391%,变异系数为1.7%,黄连上清片中黄连素的含量为0.1055±0.002%。样品用超声波震荡法提取,过滤膜过滤,滤液进样。流动相为:乙腈一十二烷基硫酸钠一乙酸(65:35:1),流速1.5ml/min,检测波长345nm,灵敏度0.05AUFS,外标峰面积法计算。
(三)HPLC法测定黄连小儿清热片中4种生物碱含量的研究
小儿清热片是由黄柏、黄连、大黄、黄芩等11味药材经提取制成的中药成方制
剂,具有清热解毒、祛风镇惊之功效。临床用于治疗小儿风热、烦操抽搐、发热口疮、小便短赤、大便不利等。其现行标准采用HPLC法测定栀子苷的含量[1]。黄连、黄柏为方中主药,生物碱是含有黄连、黄柏等中药复方制剂的重要物质基础。黄连碱、表小檗碱为黄连中特有成分,黄柏碱为黄柏中的特有成分,因此以黄连碱、表小檗碱、黄柏碱为指标评价含黄连、黄柏复方制剂的质量具有专属性 五.总结
黄连及其制剂中生物碱化合物HPLC测定实例有很多种。由于黄连的种类与炮制方法非常多,地理分布也比较广泛,因此作为药材它们的质量不易控制。黄连的主要药用成分生物碱的含量的准确测定对评价不同产地的黄连与质量监控具有重要意义。黄连生物碱含量测定的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱扫描法与紫外分光光度法等,它也是具有广泛药效作用的中药,在国内外很多种疾病的治疗都用到了它,且黄连新的药效又不断被发现。尤其是其是在抗癌、降血糖和改善心脑血管功能、抗毒等方面均具有较好药效,越来越受到人们的重视,因此,对黄连很有必要进行深入研究,对黄连中的各种生物碱进行全面分析,以开发药资源,扩大其药效作用,将有很大的社会效益和广泛的开发前景。
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2021-12-05 09:56:52【
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