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医药医学类
葛根及其制剂中黄酮类化合物的HPLC测定方法概述(二)
芪药消渴胶囊,中成药名。由西洋参、黄芪、山药、生地黄组成。具有益气养阴,健脾补肾的功效。本品为胶囊剂,内容物为褐色粉末;味微苦。用于非胰岛素依赖型糖尿病(属气阴不足、脾肾两虚证)的辅助治疗。症见:气短乏力、腰膝酸软、口干咽燥、小便数多;或自汗、手足心热、头眩耳鸣、肌肉消瘦、舌红少苔或舌淡体胖等。
葛根汤颗粒用于发汗解表,生津舒经。用于风寒感冒,证见:发热恶寒,鼻塞流涕,咳嗽咽痒,咯痰稀白,无汗,头痛身疼,项背强急不舒,苔薄白或薄白润,脉浮或浮紧。临床前药理实验表明,本品对金黄色葡萄球菌和流感病毒感染的小鼠有一定的保护作用,可使存活率升高;抑制酵母所致大鼠发热;抑制巴豆油所致小鼠耳肿胀和醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加;醋酸所致小鼠扭体反应及热板法所致小鼠疼痛有抑制作用。
心脉通片,成分为当归、决明子、钩藤、牛膝、丹参、葛根、槐花、毛冬青、夏枯草、三七。活血化瘀,通脉养心,降压降脂。用于高血压、高血脂症等。本品为薄膜衣片,除去包衣后呈棕褐色;味微苦、涩。偶有病人服药后感觉口干、腹胀、胃纳差,此乃处方偏寒所致,饭后服用可避免。
三、含葛根制剂中黄酮类化合物的HPLC测定实例
(一)芪药消渴胶囊中葛根素的HPLC测定方法
1.作者:刘同祥,王勇采用了HPLC法测定了消渴胶囊中葛根素的含量。方法:高效液相色谱法,仪器与试剂:采用Venusil MP C18柱为分析柱,甲醇-水(25:75)为流动相,检测波长:250nm,流速1.0ml/min。理论塔板数以葛根计不低于3000,供试品配置:取本品1.0g研细,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,超声处理30min,放冷,摇匀,过滤。精密量取续滤液1ml,置5ml量瓶中,加甲醇定容至刻度即可。
2.测定方法选择:测定葛根素含量的方法有比色法,紫外分光光度法,薄层扫描法,高效液相色谱法。为了减少不同实验过程造成的误差,本实验选择高效液相色谱法测定葛根素的含量,具有快速,准确,专属性强等特点。流动相选择:考察了甲醇-水,乙腈-水,乙腈-磷酸水,乙腈-柠檬酸水等体系,结果表明,以甲醇-水(25:75)为流动相时,葛根素在0.192~1.536与峰面积呈良好的线性关系(Y=701200X+11824,R^2=0.9999,n=5),平均回收率为99.53%,RSD为1.20%。葛根素的分离度和峰形最好。结论:该方法简便、结果准确、重复性好、专属性好,适用于消渴胶囊中葛根素定量分析。
(二)HPLC测定葛根汤颗粒中葛根素的含量
通过仔细阅读“HPLC法测定葛根配方颗粒中葛根素的含量”这篇文献,懂得了如何用高效液相色谱法来测定物质含量的质量标准。赵昌军,刘宏明是利用高效液相色谱法测定含量,而高效液相色谱条件为:岛津C18色谱柱。流动相:(乙腈:甲醇:水10:8:82)。流速:1.0ml/min。控制柱温;30℃,检测波长:250nm。进样量10ul。供试品配置:取葛根汤颗粒10包,混匀,精密称定1.0g,置25ml容量瓶中,加30%乙醇适量,超声处理30min,放冷,用30%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置。精密量取15ml,置中性氧化铝柱(100-200目,5g)上,用30%乙醇洗脱,收集洗脱液,置50ml量瓶中,洗脱至刻度,摇匀,即得。结果表明葛根素浓度在4.008-200.4ug/ml范围内与峰面积呈良好线性关系,y=0.0126x+0.014 1,r=1.000 0(n=6),平均回收率100.02%,RSD 0.1%。结论:此方法简便、准确,可作为葛根汤颗粒的质量控制方法。
(三)HPLC法测定心脉通片中葛根素的含量
黄燕玲,曾志红,郑文涛在今日药学期刊栏目中讲述了HPLC法测定心脉通片中葛根素的含量。色谱条件:色谱柱:KromasilC18(4.6mm×200mm,5um)流动相:甲醇-水(30:70),流速1.0ml/min,检测波长:250nm。理论塔板数以葛根计不低于2000。对照溶液制备:精密称定葛根素对照品10mg置50ml容量瓶中,用30%乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀。再取2ml置50ml量瓶中,加入30%乙醇稀释到刻度。供试品制备:取心脉通片20片研细,精密称定1g置50ml容量瓶中,加入30%乙醇40ml,超声处理5min,放冷,加入30%乙醇到刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。据结果显示,心脉通片中葛根素含量偏低,这是由于生产工艺中采用厚片葛根投料,加上采用水提取,生产流程加热时间过长等所致。可通过控制原料质量和改进生产工艺,提高葛根素的含量。制备心脉通片供试品溶液时,因其取量较大,杂质太多,使用微孔滤膜抽滤极其困难,可先使用定性滤纸抽滤,除去较大杂质,再用微孔滤膜抽滤。流动相的选择:曾采用甲醇-水(25:75),(30:70),结果发现(30:70)出峰时间适中,分离度较好,(25:75)存在出峰时间滞后现象。本法操作简便,准确,线性好,可作为控制心脉通片质量的依据之一。
四、总结
随着中药现代化进程的加快,对于中药制剂的质量标准建立也是提出了更高的要求。通过实验知道了异黄酮类化合物葛根素的含量测定问题,使用高效液相色谱法技术测定葛根素的含量,在实验中技术的关键是怎样选取正确的提取溶剂将葛根素提取完全,选取合适比例的流动相,以及能在HPLC的色谱图中出现单一峰,提高测定结果的准确性。通过阅读相关文献,我懂得了做每一个实验的严谨性和需要不断试验才能找到最准确的方法来解决相关问题,在实验过程中注意记录实验数据和正确的讨论分析所得数据,做出比较,选取最好的方法,找到实验的改进方法。
五、参考的文献:
[1]刘同祥, 王勇, LIUTong-xiang, et al. HPLC测定消渴胶囊中葛根素的含量[J]. 云南中医学院学报, 2009, 32(3):33-35.
[2]赵昌军, 刘宏明. HPLC测定葛根汤颗粒中葛根素的含量[J]. 食品与药品, 2010(09):30-32.
[3]黄燕玲, 曾志红, 郑文涛, et al. HPLC法测定心脉通片中葛根素的含量[J]. 今日药学, 2002, 12(4):10-11.
[4]HPLC测定葛根配方颗粒中葛根素的含量 阮毅铭 广东中山市中医院药剂科(528400)。
[5]野葛根中葛根素的提取及HPLC测定 张尊听 ,杨伯伦,刘谦光,刘鹏 中国医药工业杂志。
[6]国家药典委员会,中国药典{S}.北京:化学工业出版社,2005:654-647.
[7]国家药典委员会,中国药典2000年版,一部,北京:化学工业出版社。2000:273.618
[8]徐军,李瑞海,用HPLC法测定心脉通片中葛根素的含量[J].实用药物与临床,2008,11(2):120-121.
[9]蔡琳.葛根的化学成分,药理及临床作用的研究进展[J].山东化工,2014,(第8期).
[10]宋玮,李艳娇,乔雪,钱薏,叶敏,中药葛根的化学成分研究进展[J].中国药学(英文版),2014,(第6期).
[11]徐斌,林琳,查青,葛根的化学成分研究[J].食品与机械,2005,(第6期).
[12]杨东晖,陈浪,曾志,黄晓玲,李续娥,李玲.葛根化学成分的研究[J].华南师范大学报(自然科学版),2002,(第4期).
[13]李国辉,张庆文,王一涛.葛根的化学成分研究[J].中国中药杂志,2010,(第23期).
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