含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法概述 (8)(二)

3、黄芪治疗原发性心肌病

原发性心肌病多认为与病毒感染、心内膜心肌纤维化、家族遗传等因素有关,病理改变是心肌扩张、肥厚,而致心脏收缩和舒张功能障碍。对洋地黄药物易耐药或中毒。其症状表现为心悸、气短、乏力、咳嗽、水肿、脉间歇为主症。黄芪可显著增强心肌收缩力,扩张血管,增加心肌血流量,改善微循环,降低血压,从而保心肌和改善心功能。黄芪对心律失常抑制作用,视其为非洋地黄类的正性肌力药物,治疗各种心律失常。对扩张性心肌病疗效最好。

4、黄芪治疗烧伤及创伤

黄芪补气升阳益气固表,托毒生肌,利水消肿,有双向调节免疫功能的作用,可增强抗感染能力。主要调节巨噬细胞活性,促进中性粒细胞趋化作用。减少有毒因子,抗氧化、清除自由基等。可降低创面的过炎症反应,增强毛细血管抵抗力,促进微血管周围渗血减少或消失,增进创面愈合。

5、黄芪治疗带状疱疹后遗神经痛

研究证明,由于水痘带状疱疹病毒引起的炎症性皮肤病,该病毒有嗜神经性,故疼痛非常明显。黄芪性偏于走表,乃表皮之药能使毒邪以深就浅,托毒外出,去毒又可解其瘀且可益气活血通络。黄芪能抗炎,改善毛细血管通透性, ,抗过敏作用。

6、黄芪治疗恶性肿瘤

恶性肿瘤的发生、发展与机体防御功能衰退,尤其细胞免疫功能低下有关,而生着的肿瘤又会加重机体免疫功能的抑制,从而助长了肿瘤的发展。黄芪多糖能增强网状内皮系统的吞噬功能,促进抗体形成,促进T淋巴细胞转化,增强NK细胞的细胞毒活性,从而增强机体免疫力。黄芪注射液配合化疗可减轻化疗药物对机体各种功能细胞的杀伤作用,提高肿瘤患者细胞免疫功能。黄芪中富含的皂甙、多糖、异黄酮类化合物、多种氨基酸及硒元素等能降低顺铂等化疗药物的肾毒性。动物实验显示，对骨髓造血功能有明显保护作用对白细胞、血小板数、网织红细胞数和巨核细胞数下降有明显回升作用。这些均奠定了黄芪注射液配合化疗有减毒增效作用的依据。黄芪可增强抗辐射及抗感染能力加快血循环减轻辐射部位的炎症水肿及感染。黄芪能干预着床癌细胞增殖,激活转移抑制基因,阻断癌细胞的耐药性,调节的比值,有利于抑制癌细胞的生长。

7、黄芪治疗糖尿病及其并发症

糖尿病是一个复合病因的综合病症,病因的异质性导致临床表现的多样性。西医认为紧张或心理情志因素可致内分泌轴免疫网络分泌失调,焦虑状态血胰岛素含量减少,可诱发糖尿病。饮食失控致肥胖产生胰岛素抵抗可诱发糖尿病。体内肾上腺素、肾上腺皮质激素分泌增加与胰岛素相抵抗,促进糖原异生升高血糖而发生糖尿病。研究证实高脂血症，血液流变学异常,血流缓慢、组织缺氧,既是糖尿病的发病因素,又是其病理产物。糖尿病主要与体内糖、脂肪、蛋白质代谢失常、胰岛素分泌不足有关。胰岛素是人体能源利用的动力,又是糖原分解与合成的始动环节。胰岛素缺失可致糖不能利用,脂肪和蛋白质分解增加乳酸堆积,酮体产生致临床症状发生,黄芪促进Ⅱ型胰岛素分泌以利各种营养物质利用与代谢。但不少中药与西药降糖药有协同作用,二者合用比单独使用可增强疗效。血淤与血液的高黏高凝状态,与糖尿病和微血管并发症的形成密切相关,活血化瘀是防治糖尿病各种并发症的重要治则。血糖在体内堆积可致糖中毒;脂肪堆积可致高脂血症。增加胰岛素分泌的中药之一,黄芪对2型糖尿病有促进胰岛β细胞分泌胰岛素的作用芪有双向调节免疫功能的作用,促进蛋白质合成,减少蛋白质漏出,糖尿病肾。黄病的特征性病理改变是肾小球基底膜增厚和系膜扩张,目前治疗的主要方法是严格控制血糖和血压及饮食,以减轻或延缓的进展。微量尿蛋白是DN早期而敏感的指标。黄芪注射液主要作用是扩血管、降血糖,增加肾血流量,降低血小板黏附率,改善微循环,抗缺氧及调节免疫、清除自由基等作用。黄芪对肾小球基底膜的电荷屏障和机械屏障均有保护作用。黄芪减轻通透性蛋白尿,对肾性蛋白尿有减轻和消除作用且疗效确切。 ET-能直接刺激血管平滑肌细胞,肾小球系膜细胞增生、肥大。糖尿病肾病患者ET-1水平明显高于正常人,且与24h尿蛋白排泄率呈正相关。

（三）黄芪在日常生活的应用

1、补脾益气

用于脾胃虚弱，食少便溏，倦怠乏力之症，以及脾虚泄泻，久泻脱肛等。北芪的补气力强，善补肺气，可以治疗肺虚气短，声低懒言、神疲乏力，容易感冒之症。常配党参、白术、淮山、炙甘草同用。用蜜制后的北芪补益力更强。

2、固表止汗

用于表虚自汗。北芪补气之中而有外达之性，故能补气固表以止汗。北芪的固表止汗作用较好。临床上通过不同配伍，能治疗各种汗出症;同助阳药配伍，治阳虚自汗;同补气药配伍，治疗气虚自汗;同滋补药配伍，治阴虚盗汗。若气血不足，外受风寒，又往往不能作汗，在解表药中配伍黄芪，能鼓舞阳气，补益汗源，使其发汗，所谓“黄芪有汗能止，无汗能发”就是这个道理。这时宜生用。

3、益气升阳

用于气虚下陷之症。中医认为脏器的下垂是由于中气下陷之故，北芪善于益气升阳，可治疗脱肛、子宫脱垂、胃下垂、肾下垂以及气虚血脱的崩漏等症。中医用补中益气汤治疗脏器下垂各症，补中益气汤中的北芪就是取其补气之中而有上升之性，能升脾胃之清阳。这时宜蜜制后用。

黄芪除了上面介绍的作用以外，黄芪还具有补气，补益的作用。是能够补脾健胃，补气固脾，排毒，排脓等作用，黄芪在很多地方都是当做食材来使用的。

二、皂苷类化合物

（一）皂苷类的概述

皂苷是苷元为三萜或螺旋甾醇类化合物的一类糖苷。苷元为三萜类化合物则称为三萜皂苷，;三萜类皂苷主要存在于五加科、豆科、远志科及葫芦科等。有许多植物的皂苷含量很高，如甘草根含有2%-12%的皂苷，皂树皮含有10%的皂苷，七叶树种子含有高达13%的七叶皂苷，薯蓣的球状根茎含有丰富的甾体皂苷，是人工合成激素的重要原料。此外，海星、海参等海洋生物也存在皂苷类化合物。皂苷根据苷元连接糖链数目的不同，可分为单糖链皂苷，双糖链皂苷及三糖链皂苷。在一些皂苷的糖链上，还通过酯键连有其他基团。用力振荡其水液可产生持久性的泡沫。一些富含皂苷的植物提取物被用于制造乳化剂、洗洁剂及发泡剂等。此外，一些皂苷对细胞膜具有破坏作用，表现出毒鱼、灭螺、溶血、杀精及细胞毒等活性。皂苷的表面活性作用受其连接糖链数日的影响，一般单糖链皂昔的溶血，灭螺作用更强，双糖链皂苷的作用稍弱。皂苷的溶血作用也与昔元有关，如以人参三醇为昔元的皂昔其有明显溶血作用，而以人参二醇为苷元的人参皂苷则具有抗溶血作用。用一些颜色反应对皂苷进行初步鉴定，最常用的颜色反应为Liebermann-Burchard反应，其方法如下：在试管中将少量样品溶十乙酸酐，再沿试管壁加入浓硫酸，如两层液体交界面呈紫红色则为阳性反应。

（二）皂苷类的测定方法

1、比色法

比色法的原理是：三萜皂苷分子中缺少发色团和助色基需要某种试剂与其反应形成发色基团后显色，在某个波长下测定其吸光度，再根据吸光度与浓度的关系（标准曲线），计算出样品的浓度，从而计算出样品中总皂苷的含量。

2、薄层扫描法

依据五加科植物人参三萜皂苷中人参皂苷Rg1 在薄层板上分离效果较好和荧光分光光度法高灵敏度的特点，建立了薄层色谱-荧光分光光度法测定人参中人参皂苷Rg1 薄层色谱法。

3、高效液相色谱法

近年来，随着高效液相色谱仪的普及，越来越多的皂苷成分开始使用到了这项技术。

（三）含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法实例

一、HPLC-ELSD测定黄芪提取物中黄芪皂苷Ⅰ,Ⅱ及乙酰黄芪皂苷

测试单位：成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室;江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室;

研究以HPLC-ELSD法测定黄芪提取物中黄芪皂苷Ⅰ,Ⅱ,乙酰黄芪皂苷Ⅰ的含量。方法:色谱柱为WelcC18(4.6 mm×250 mm5,μm),流动相为乙腈和水,梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温30℃,漂移管温度80℃,气体(空气)压力为50 psi。结果:黄芪皂苷Ⅰ,Ⅱ,乙酰黄芪皂苷Ⅰ的平均回收率分别为101.16%,99.34%,100.43%,RSD分别为2.76%,2.28%,2.55%,含量分别为4.01%,1.70%,3.67%。结论:方法简单易行,结果可靠,分离效果好,可作为黄芪提取物中皂苷类成分定量的方法。

二、HPLC-ELSD法测定脑通颗粒中黄芪甲苷和人参皂苷Rb_1的含量及稳定性

测试人员：陈祖云，石凌云，黄勇，乔希，王爱民

建立测定脑通颗粒中黄芪甲苷和人参皂苷Rb1含量的方法,并用该方法对制剂中黄芪甲苷和人参皂苷Rb1的稳定性进行考察。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法。色谱柱为Elipse-XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1 mL·min-1,柱温为40℃;采用ELSD器,漂移管温度为40℃,雾化器压力为0.30 MPa。结果:黄芪甲苷和人参皂苷Rb1的进样浓度分别在0.058 8～0.940 8 mg·mL-1(r=0.998 9)、0.119 6～1.913 5 mg·mL-1(r=0.999 1)范围内的对数值与各自峰面积的对数值呈良好线性关系;平均加样回收率分别为97.28%、98.53%,RSD分别为3.6%、3.0%(n均为9)。制剂中黄芪甲苷和人参皂苷Rb1含量经加速试验考察,稳定性良好。结论:本方法简便、快速、准确,可用于脑通制剂中黄芪甲苷和人参皂苷Rb的含量测定;经稳定性考察制剂中黄芪甲苷和人参皂苷Rb质量稳定。

三、HPLC法测定当归补血配方颗粒中黄芪甲苷的含量

测试人员：李广胜，覃芳，杨季菱，胡文文，张俊丽

建立测定当归补血配方颗 粒中黄芪甲苷含量的方法,并考察不同冲化条件对其含量的影响。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent C_(18),流动相为乙腈-水(28∶72,V/V),流速为1.0 ml/min,柱温为25℃,进样量为10μl。结果:黄芪甲苷检测进样量线性范围为2.91~17.46μg;精密度、稳定性的RSD2%、重复性试验 的RSD=3.63%,加样回收率95.76%~98.20%,RSD为1.03%(n=6)。较佳冲服方法为将两种颗粒混合后用80℃水冲化,保温5 min后服用。结论:本方法操作简便、重复性好,可用于当归补血配方颗粒中黄芪甲苷含量的测定

参考文献

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