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含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法概述 (9)(二)
1、比色法:比色法测定甾体皂苷的含量其原理同三萜皂苷相同,但因其化学结构与三萜皂苷不同,故所选用的显色剂不同。一般来说,
测定总甾体皂苷的显色剂是浓硫酸或香草醛-冰乙酸溶液和高氯酸。薛小娟等人利用知母中菝葜皂苷元能与浓硫酸发生显色反应的原理, 通过测定总皂苷水解产物中菝葜皂苷元的含量来测定知母总皂昔含量[24]。李敏等人在测定天冬中总皂苷含量时,对不同的显色剂;①0.2ml 香草醛-冰醋酸和0.8ml 高氯酸; ②8%香草醛-乙醇液和77%硫酸;③高氯酸;④94%硫酸进行了比较,发现高氯酸的显色效果较好[21]。总的来说,比色法的特点是:①方法灵敏,但显色试剂的专属性较差,通常用于总皂苷的测定;②要求有特定的显色剂;③要选择合适的对照品。
2、高效益相色谱法一二级管阵列检测器法: 都述虎等人通过采用waters 高效液相色谱仪和996二极管阵列检测器(DAD)对穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元含量进行测定, 建立了反相高效液相色谱法测定穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元的含量的方法[25]。色谱条件如下:Bondapak C18 柱,甲醇为流动相,流速1.0ml / min,检测波长208nm。刘中博等人同样采用高效液相色谱仪,2996 型和二级管阵列检测器, 对薯蓣属植物有效成分甾体皂苷中的原薯蓣皂苷进行了定, 该方法不仅灵敏度高、专属性强、操作简单易行,而且将质量控制与活性成分相结合。色谱条件如下: 色谱柱为XterraTM ODS(250mm×416mm,5μm),以乙腈-水(27:73)为流动相, 体积流量110mL / min,柱温35℃,检测波长203nm[26]。
3、高效液相色谱-示差折光检测器法:示差折光检测器(differential refractometers detector,RID)是除紫外检测器之外应用最多的检测器。其优点是通用性强,操作简便;缺点是灵敏度低,最小检测浓度达10-6 ~10-7g/mL,不能做痕量分析,线性范围宽小于105,对压力和温度变化敏感,此外,由于洗脱液组成的变化会使折射率变化很大,因此,这种检测器也不适用于梯度洗脱。牛伟等人对采用反相高效液相色谱-示差折光检测器对蒺藜全草和果实中的甾体皂苷元海柯皂苷元、替告皂苷元进行了定量比较的初探。色谱条件如下:色谱柱:Kromasil C18(250mm×4.6mm,5μm)。流动相是甲醇;检测器:示差折光检测器(设置):灵敏度≥0.2min(4s),样品池温度:35℃。紫外检测器(设置):灵敏度>=0.1min(2s),检测波长:209nm;柱温:室温(28.1℃);流速:1mL/min;分析时间:12min;进样量:10μL[27]。由于甾体皂苷元无紫外吸收或紫外吸收较弱且主要 存在于低波区,给HPLC 定量检测带来了一定的困难。而示差折光检测器属于总体性能检测器, 是根据不同物质具有不同折射率来进行组分检测的, 凡是具有与流动相折射率不同的组分,均可以使用这种检测器,因此是一种通用型检测器,它对没有紫外吸收的物质,如高分子化合物,糖类,某些皂苷等都能检测。
3、高效液相色谱—蒸发光散射检测器法:和三萜皂苷的测定相比,高效液相色谱-蒸发光散射检测器法更多地应用在了甾体皂苷的测定中。吴弢等人采用Shimadzu 210AT 高效液相色谱仪和Alltech ELSD500 型检测器对湖北麦冬中主要皂苷的含量进行了测定,色谱条件如下:气化温度93.18℃,气体流速(N2)2.47 SL PM;色谱柱:A lltech V erspapack C18(416mm×250mm);流速:2mm/ min。流动相:乙腈-四氢呋喃-水(45.6∶2.9∶51.5);流速:0.7mL / min[28]。唐晓清等人利用HPLC-EL SD 法对麦冬中鲁斯可皂苷元和薯蓣皂苷元进行了分离分析, 测定了麦冬中鲁斯 可皂苷元的含量。
(二)苷类化合物在医学上的作用
本发明涉及天然药物化学及医药技术领域,公开了从苋科(Amaranthcea)植物青葙中分离到的其化学结构通式为式(1)所示的两种青葙皂苷新化合物青葙苷A(Celosin A)和青葙苷B(Celosin B)的结构及其提取分离方法;以及包括所述二种新化合物在内,其化学结构通式为式(1)的青葙皂苷类化合物及其衍生物在制备治疗和预防包括脂肪肝、肝损伤、肝纤维化、肝硬化;冠心病、心肌梗塞、心肌缺血、脑缺血、脑梗塞、脑中风;糖尿病、高胰岛素血症、胰岛素抵抗力症、肥胖症、葡萄糖不耐受性、和/或高血压肥胖症、高脂血症;痴呆;抑郁或焦虑、失眠等疾病在内的药物方面的应用
(三)鉴定含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC的发展
黄芪是我国常用传统中药材之一, 其质量关系到用药安的全性和有效性。文章通过文献研究的方法,对黄芪的含量测定、指纹图谱、分子鉴定等进行综述,期望能为黄芪的质量评价提供参考和依据。
黄芪(ASTRAGALI RADIX) 为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var.mongholicus (Bge.) Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.的干燥根。味甘,性微温,归肺、脾经。具有补气升阳、益卫固表、利尿消肿、生津养血、托毒排脓、敛疮生肌等功效,临床用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泻脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气虚水肿、痈疽难溃、久溃不敛、血虚痿黄、内热消渴等症[1]。黄芪化学成分种类很多,
含多糖类、皂苷类、黄酮类、氨基酸及多种微量元素和亚麻酸、亚油酸、谷甾醇、叶酸等, 其中黄芪多糖和黄芪皂苷等为主要的天然活性成分, 黄芪多糖具有免疫调节、提高巨噬细胞活性、抗肿瘤等作用[2-6],黄芪甲苷具有抗炎、镇痛、降压、镇静等药理作用[7],为了更好地控制黄芪药材及饮片的质量,为临床合理应用提供科学依据,本文对黄芪的质量研究进行综述,为黄芪质量评价研究提供参考。
性状及显微鉴定研究
膜荚黄芪和蒙古黄芪为同一物种的原种和变种,在外部形态等方面存在一定的差异,但有时界限不是非常明确陈少勇[9]在显微镜下观察黄芪及其伪品,发现正品黄芪含有淀粉粒,不含草酸钙结晶,而其他伪品不具备此特征,因此可以鉴别出正品黄芪及其伪品。王俊杰等[10]采用电子显微镜对蒙古黄芪和膜荚黄芪的种子进行了鉴别,两种黄芪种子的萌发孔形状、种脐和种皮的微观结构有明显差异,可作为鉴别两种黄芪种子的依据。
参考文献:
1. 李力,陈宇红. 黄芪皂甙提取与含量测定方法研究[J].. 《福建分析测试》. 2004, 13(Z1):2006-2007
2. 徐先祥,张睿,夏伦祝. 黄芪皂苷的三种提取方法对黄芪甲苷含量的影响
[J]. 《中国兽药杂志》. , 2008, 42(4):12-14
3. 周超,何轶,林瑞超,鲁静. 黄芪4种皂苷提取物的制备及其在黄芪总皂苷含量测定中的应用 [J]. 《中国实验方剂学杂志》. 2013, 19(22):56-59
4. 王晶,张宇,李玉莲,管海波. 黄芪皂苷水解前后黄芪甲苷的含量测定 [J].. 《中华医药学杂志》. 2003(1):56-57
5. 石海莲,吴大正,胡之璧. 黄芪皂苷甲的研究进展 [J].. 《中国药学杂志》. 2008, 43(8):565-567
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