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含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法概述 (10)(三)
含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法概述
黄芪注射液和黄芪口服液是从黄芪中提取有效成分制成的制剂,可增强心肌收缩力,扩张冠状动脉,保护心肌细胞,改善心脏功能; 增加超氧化歧化酶活性,清除自由基; 抑制血小板凝聚,降低血液黏稠度,改善微循环; 增强肾上腺素皮质功能,改善肾脏功能; 防止肝糖原减少,保护肝脏,在临床有广泛的应用[35]
。在黄芪制剂的质量控制方面,测定黄芪甲苷的方法比较多[36-42]。由于中药是复杂体系,经多成分多途径协同作用发挥药效,因此建立多组分同时定量的分析方法,对全面控制中药制剂的质量具有重要意义。为了更全面的评价制剂质量,本实验采用 LC-MS-MS 法同时测定制剂中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素的含有量,为黄芪注射液和黄芪口服液质量标准的提高提供依据,也更符合中医药多组分、多靶点作用模式和整体性理论。储继红[43]等将黄芪注射液和黄芪口服液甲醇稀释液在 Agilent ZORBAX SB C18( 2. 1 mm × 150 mm,5 μm) 色 谱 柱 上 分 离,流动相 为 甲醇-水 ( 含 0. 1% 甲 酸,70∶30,V /V) ; 体积流量 为 300μL /min。MS 采用电喷雾离子源,多反应监测方式进行正离子扫描,5 种成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,在黄芪注射液和黄芪口服液中的平均回收率分别为 96. 8%~102.3% 和 95.9%~101. 5%。结果表明通过建立 LC-MS-MS 法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素 5 种有效成分的含有量,测得结果准确、可靠、灵敏度高,可用于黄芪注射液和黄芪口服液的质量控制。
(三)克痨星胶囊
克痨星胶囊是由黄芪、夏枯草、川贝母等18味药制成的中成药,具有养阴清肺、补气健脾等功效,用于治疗难治性或低耐受性肺结核病人。由于处方庞大,采用传统TLC法检测黄芪甲甙的含量杂质干扰大,斑点不明显。克痨星胶囊中黄芪只占全方的7.09%,采用传统定量方法难以定量。黄芪中的环黄芪醇类皂甙(cyclo astragenol)结构间的差异主要在于所连接糖部分的羟基乙酰化的位置与数目不同[46]。张显杰等[47]将黄芪中的环黄芪醇类皂甙用1%的醇制氢氧化钾皂化,使糖部分的乙酰基均转变为羟基,使环黄芪醇类皂甙均转变为黄芪甲甙,以HPLC方法进行检测,HPLC条件:Waters公司Novapak C18(3.9mm× 150mm)色谱柱,40%甲醇为流动相,检测波长204nm,线性范围0.72~ 1.62μg,回归方程Y=1.7247× 10- 5X+ 1.534× 10- 6, r= 0.998 9,平均回收率94.45%, RSD为2.03%(n= 6)。本法可以快速准确地测定克痨星胶囊中环黄芪醇类皂甙与黄芪甲甙的含量,为克痨星胶囊中黄芪的含量测定建立质控标准。
三、黄芪的HPLC指纹图谱研究进展
(一)高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)指纹图谱
李桂兰等[48]将12批黄芪药材经甲醇超声后,以乙腈和水梯度洗脱,由于黄芪皂苷类成分仅在紫外末端具有吸收,故选择208 nm为检测波长,指认了芒柄花素和黄芪甲苷色谱峰的位置,共标出了12个较大的共有峰,且根据指纹图谱总结出了同产地不同年限黄芪中化学成分的变化规律。
石玉娟[49]分析了14批山西道地黄芪药材的指纹图谱,以乙腈和水为流动相,208 nm为检测波长进行检测,共标出了11个共有峰,且不同产地的药材中黄芪甲苷均得到很好地分离。
宋肖炜等[50]以芒柄花素为内参比峰,用甲醇超声提取后,以乙腈和0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长为203 nm,进行指纹图谱研究,共标出了15个共有峰,并通过与对照品对照,对其中4个色谱峰进行了定位。
白根本等[51]比较了26批购自全国不同地区的市售黄芪饮片,以乙腈和0.05%磷酸水溶液为流动相,检测波长为203nm,进行指纹图谱研究,共标出了25个共有峰,发现饮片相互吻合程度较低,说明市售黄芪饮片整体质量的一致性欠佳。
胡晓等[52]考察了黄芪药材中皂苷类成分分析的色谱条件,选用Ultimate XB-C18柱,柱温35 ℃,乙腈-0.5%磷酸梯度洗脱,205 nm波长下检测,共找出了16个共有峰;所建立的方法可操作性强,适用于黄芪中皂苷类成分的指纹图谱研究。
(二)HPLC-蒸发光散射检测器(ELSD)指纹图谱
杜国军等[53]将黄芪药材经甲醇索氏提取后,以环黄芪醇、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素和黄芪甲苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为对照品,使用ELSD检测器,并经乙腈和水梯度洗脱,研究了来自蒙古黄芪主产区的2种不同种植模式下的29批黄芪药材的HPLCELSD指纹图谱,共标出了22个共有峰,经分析后发现2种种植模式下的黄芪药材得到了很好地区分。
(三) HPLC-DAD-ELSD指纹图谱
梁瑾等[54]采用HPLC-DAD-ELSD联用法,将黄芪药材用95%乙醇回流提取,以乙腈和水梯度洗脱,检测波长254 nm,漂移管温度112.8 ℃,载气流速3.2 L/min,进行检测,结果10批黄芪药材HPLC-DAD指纹图谱中共找到了 14 个共有峰,鉴别了毛蕊异黄酮和芒柄花素;HPLC-ELSD指纹图谱中共找到9个共有峰,鉴别了毛蕊异黄酮苷、黄芪甲苷、黄芪甲苷Ⅱ、黄芪甲苷Ⅲ,且10批黄芪药材相似度良好。
四、小结
黄芪主要化学成分为皂苷类、黄酮类和多糖类等。黄芪甲苷是其主要活性成分之一,常作为黄芪药材质量控制的主要指标。黄芪甲苷常用的含量测定方法,有薄层扫描法和高效液相色谱法。薄层描法含量测定重现性较低,操作繁琐,因此,多学者通过对样品的前处理条件进行了研究,并建立了中药复方制剂中黄芪甲苷含量测定的HPLC法,结果表明HPLC法分离度好,精密度和重现性良好,回收率高,适合黄芪类制剂产品的质量控制。
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