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含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法概述(二)
含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法概述
3 含黄芪制剂的种类和特点
根据黄芪化学成分的不同药理作用,黄芪在临床上主要用于脾肺气虚、中气下陷之症,治疗冠心病、心力衰竭、缺血性脑血管疾病,防治感冒,治疗小儿支气管哮喘,治疗慢性乙肝、慢性肾炎、病毒性心肌炎、流行性出血热及消化性溃疡等。同时,黄芪在保健品、食品、化妆品等行业的应用也迅速升温。黄芪与其他中药配伍可防治肥胖,尤其适用于皮肤恍白、肌肉松软、多汗、容易疲劳、身体沉重或下肢浮肿等虚症的肥胖人或伴有关节疼痛的患者。因此,黄芪的国际及国内市场开发潜力巨大,具有广泛的应用前景
目前临床常用的黄芪新剂型主要有黄芪口服液、黄芪颗粒(冲剂)、注射用黄芪多糖灭菌粉末、黄芪注射液等。黄芪口服液为棕黄色的澄清液体,含丰富的氨基酸、多糖、胡萝卜素、叶酸、多种微量元素、黄酮、黄芪皂苷、胆碱和葡萄糖醛酸等,用于治疗慢性病毒性肝炎、小儿反复呼吸道感染( RRI)、小儿肾病综合征、恶性肿瘤等。黄芪颗粒(冲剂)为淡黄色颗粒,1g成药相当于1g生药黄芪。该药口感好,可作为治疗小儿肾病较好的辅助用药,对小儿RRI也有较好疗效。黄芪注射液有效成分以黄芪皂苷为主,1mL黄芪注射液(相当于生药2g)含黄芪甲苷不得少于0.08mg,可供肌内注射或静脉滴注,临床已广泛用于冠心病、充血性心力衰竭(CHF)、病毒性心肌炎(VMC)等。注射用黄芪多糖灭菌粉末为类白色无定形粉末,无臭无味,总糖量以葡萄糖计不少于85%,主要用于癌症患者化疗或放疗后的辅助治疗。
根据黄芪开发出的新的药理活性,临床用药的需要,以及随着制剂技术的提高,研究人员尝试将黄芪提取物赋予更为新型的制剂剂型中,如黄芪纳米微粒、黄芪脂质体、复方黄芪鼻腔喷雾剂等。
含黄芪的制剂在临床上均发挥着重要的作用,而且越来越多的新型的黄芪制剂相继研究和应用于临床,这对含黄芪制剂的含量检测、质量控制提出了更高的要求,传统的检测方法已经不能满足黄芪制剂分析检测的要求,高效液相色谱法的应用已经成为当下研究的热点,陆续有关于HPLC法测定黄芪制剂皂苷类成分的研究报道出来。
4 HPLC法测定含黄芪制剂皂苷类成分的实例
4.1 含黄芪制剂HPLC样品制备方法
杞黄颗粒是由黄芪、枸杞、女贞子、茯苓、泽泻组成的主治年老体虚,气血不足,肝肾亏损的中药新药;具有益气血,补肝肾,延缓衰老之功效;方中黄芪为君药,黄芪甲苷为其主要指标成分和有效成分之一,药理实验表明黄芪甲苷对抗体形成细胞数具有双向调节作用,可以调节机体状态,加强其适应能力,还能抑制自由基的产生和清除体内过剩的自由基,保护细胞免受自由基产生的过度氧化作用的影响,进而延长细胞寿命。按照《中国药典》2005年版Ⅰ部“黄芪”项下的有关规定,采用HPLCELSD法测定复方黄芪制剂中黄芪甲苷含量,实验证明:该方法灵敏度、稳定性、及重现性均较好,是检测黄芪甲苷的一种较理想的方法,具有广泛适用价值。供试品溶液的制备。精密称取供试品5 g,至100 ml的具塞锥形瓶中,各加入甲醇溶液50 ml,采用超声(功率500 W频率75 kHz)提取2次,每次各30 min的方法对样品进行提取,放冷,过滤,合并滤液,滤液水浴挥干,残渣加水10 ml,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次40 ml,合并正丁醇提取液,用氨试液提取2 次,每次40 ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干用甲醇溶解并转移至5ml 量瓶内,加甲醇至刻度,摇匀,微孔滤膜滤过,弃去初滤液,续滤液即可作为供试品溶液. 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品5.09 mg,置10 ml量瓶 中,甲醇定容,配成0.509 mg・ml-1的对照品溶液。色谱条件 Shimpack C18ODS(5μm,150 mm×4.6 mm)色谱柱,流动相:乙腈水(32∶68),柱温:30℃;检测器参数:漂移管温度:40℃,气流压强:4.1Bar气流量;流速:1.0 ml/min。色谱条件 Shimpack C18ODS(5μm,150 mm×4.6 mm)色谱柱,流动相:乙腈水(32∶68),柱温:30℃;检测器参数:漂移管温度:40℃,气流压强:4.1Bar气流量;流速:1.0 ml/min。线性关系精密吸取对照品溶(0.509 mg・ml-1)4,6,8,10,15μl,按上述色谱条件测定峰面积,以对照品进样量的常用对数X为横坐标,峰面积积分值的常用对数Y为纵坐标,得回归方程:Y=1.614X+4.257 7,r=0.999 6(n=5)。结果表明:黄芪甲苷在2.036~7.635 μg范围内线性关系良好。
4.2HPLC法测定含黄芪制剂皂苷类成分实例讨论
检测方法的选择,此处研究曾采用薄层扫描法、HPLC紫外检测法以及HPLCELSD法测定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量,实验表明采用薄层扫描法和HPLC紫外检测法其精密度、稳定性、重现性、回收率实验均不及HPLCELSD法好,薄层扫描法因受薄层板厚度、均匀度、薄层展开环境,显色条件等诸多因素的影响其重现性尤难达到要求,而HPLC-紫外检测法对于仅有末端吸收的皂苷类化合物,因其吸收强度较弱,所以很难达到基线分离,其稳定性,准确度因此受限。而采用HPLCELSD法其蒸发光散射检测器适于仅有末端吸收或无紫外吸收的皂苷类化合物的测定,它不依赖于样品的光学特性,不受官能团的影响,任何挥发性低于流动相的样品均能被检测。该法分离度好、前处理简单、重现性好、回收率高、结果准确,是一种良好的测定方法,故本研究最终采用HPLCELSD法测定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量。
5 小结与展望
随着中药现代化进程的加快,对于中药制剂的质量标准建立也是提出了更高的要求。中药类活性成分因为结构复杂和成分的多样性给分析检测带来了巨大的困难,黄芪制剂的皂苷成分的定性和定量亦是如此。为此药学工作者进行了大量深入的研究,采用了西药检测中常用的HPLC法对黄芪制剂皂苷成分进行了测定,并取得了一定的成果,测定结果的准确性更高,操作更为简便。当然HPLC法在检测时也存在着一定问题,例如当黄芪皂苷结构相类似时,可能难以达到组分间的完全分离,给测定结果带来一定的误差,其次在HPLC法定量时,需要有相应的对照品,但是所有成分的对照品的制备难度依然存在,在缺少对照品时很难对皂苷成分进行准确定量。
虽然目前HPLC法用于黄芪制剂皂苷成分的检测还存在一定的问题,但是随着HPLC技术的不断更新升级,以及中药活性成分提取分离技术的提高,HPLC法用于测定黄芪皂苷成分含量会有着良好的应用价值。
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