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山楂中黄酮类化合物的测定方法概述(一)
目 录
一.山楂黄酮的研究现状…………………………………………3
(一).山楂黄酮的研究目的...............................................................3
(二).山楂黄酮的药用价值………………………………………….3
二.山楂黄酮的测定方法…………………………………………… 3
(一).总黄酮的含量测定………………………………………………4
1.高效液相色谱法…………………………………………………….4
2.分光光法…………………………………………………………….4
3.毛细管电法………………………………………………………….4
三.试验结果…………………………………………………………..5
(一)不同的测定方法有不同的特点……………………………...5
参考文献………………………………………………………………5
一.山楂黄酮的研究现状
(一)山楂黄酮的研究目的
目的测定并比较不同生长期山楂叶中黄酮类化合物含量的差异。方法
采用分光光度法和高效液相色谱法检测黄酮类化合物的含量。结果在不同的生长期山楂叶中总黄酮和牡荆素鼠李糖苷的含量都在8月份最高,然后逐渐降低。结论 以提取黄酮类化合物为目的的山楂叶最适宜在8月份采收。为了更合理地综合开发利用山楂叶和确定最佳采收期本文对不同生长期的山楂叶中的总黄 酮和牡荆素鼠李糖苷分别进行了含量比较分析。对山楂叶中黄酮类成分进行提取。
常用的方法主要有乙醇回流法和酶法。这些方法存在提取时间长、提取液中杂质多(如无机盐、蛋白质、糖等)、分离困难、能耗高、热敏性化合物易发生变性等不足。而超高压提取技术是一种新兴的天然药物有效成分提取技术它是利用100 mPa以上的流体静压力作用于料液上经过短时间提取后迅速卸压然后再进行分离纯化的一种提取技术。本实验将超高压提取技术应用于山楂叶黄酮提取大大缩短了样品的制备时间。
(二)山楂黄酮的药用价值
山楂叶为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.Var.Major N.E.Br. 或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶山楂叶中所含的黄酮类成分具有降压、强心等多种药理活性尤其对缺血性心肌损伤有明显的保护作用并有清除自由基、抗氧化作用以及保护DNA。山楂黄酮能促进脂肪消化,增加胃消化酶的分泌促进消化,山楂黄酮对胃肠功能有一定调整作用。它能扩张冠状动脉,增加冠脉流量,保护心肌缺血缺氧;并可强心、降血压及抗心律失常;山楂黄酮又降血脂,抗动脉粥样硬化,能降低血清胆固醇及三酯,通过提高血清中高密度胆固醇及其亚组分浓度,增加胆固醇的排泄。
二.山楂黄酮的测定方法
(一)总黄酮含量测定
1.高效液相色谱法
①原理植物类样品用石油醚脱脂后,经甲醇加热回流提取,以高效液相色谱法分离,在紫外检测器360nm条件下,以保留时间定性、峰面积定量。
②仪器和试剂:高效液相色谱仪、紫外检测器、层析柱、超声波清洗仪、索氏提取器、微孔过滤器(滤膜0.45um)、甲醇(色谱纯)、芦丁标准品、石油醚,盐酸,磷酸(分析纯)。、去离子水、芦丁标准溶液:精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg,加甲醇溶解并定容至100ml,配成150ug/ml的芦丁标准溶液
③操作步骤
固体样品:称取2.0g干燥的固体样品,研细,置于索氏提取器中,用石油醚(60~90℃)提取脂肪等脂溶性成分,弃去石油醚提取液,剩余物挥去石油醚,加人甲醇50ml和25%HC1 5ml,80℃水浴回流水解1h,取出后快速冷却至室温,转移至50ml容量瓶中,甲醇定容,经0.45um滤膜过滤,供分析用。
液体样品:准确吸取样品2.0ml,直接以石油醚萃取脱脂,挥去石油醚后,以甲醇溶解并定容,经微孔滤膜(0.45um)滤过后供测定用。(2)色谱分离条件
色谱柱:CLC-ODS,6mm×150mm,5um;
流动相:0.3%磷酸水溶液:甲醇(V:V)=40:80,临用前用超声波脱气;流速:lml/min;柱温:40℃;检测波长:360nm;灵敏度:0.02AUFS;进样量:20ul
样品测定:准确吸取样品处理液和标准液各10ul,注入高液相色谱仪进行分离,以其标准溶液峰的保留时间定性,以其峰面积计算出样品中总黄酮的含量。4、结果计算
2.分光光度法
①原理 黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总称,一般都具有4位羰基,且呈现黄色。黄酮类化合物的3—羟基、4—羟基或5—羟基、4-羰基或邻二位酚羟基,与铝盐进行络合反应,在碱性条件下生成红色的络合物。
本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后,用分光光度法于510nm波长下测定其吸光度,与芦丁标准品比较,进行待测物中总黄酮的定量测定。
②仪器和试剂:722分光光度计、索氏提取器、真空泵,盐基交换管等、恒温水浴,分液漏斗、芦丁标准品、亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠(分析纯)、氯仿,无水乙醇,甲醇(分析纯)、5%香草醛溶液:称取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至100ml、聚酰胺树脂、去离子水。
③操作步骤
固体样品:称取1~2g干燥的固体样品,用滤纸包紧,置于索氏提取器中,加入50~100ml 70%乙醇溶液浸润后,在80℃水浴下回流3h,至提取液无色为止。粗提液冷却后,减压抽滤,并用少量25%乙醇溶液洗涤滤渣,合并滤液。在50℃下减压蒸馏,除去其中的乙醇,直至索氏提取器内溶液呈无醇味。倒出容器内溶液,用30ml热水分3次洗涤,抽滤后,将滤液倒入分液漏斗中,以75ml氯仿分3次萃取脱脂,待完全分层后,收集各次下层水溶液并定容至50ml。
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