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山楂中黄酮类化合物的方法测定叙述(一)
山楂中黄酮类化合物的方法测定叙述
山楂是一种常用的消导类中药,近年研究证明,山楂还有降压降脂和防止冠状动脉粥样硬化的作用。此作用主要和山楂中含有的黄酮类化合物有关,所以在降压降脂类的中药组方中,应选择黄酮含量高的山楂作为原料,以更好地发挥疗效。这里介绍一种测定山楂中黄酮成份含量的方法.
摘 要:通过利用紫外分光光度计测定吸光度的方法,研究了山楂中总黄酮在P最EGNH4)O2S4形成的双水相系统中的萃取结果,/(在p将3m终的实验结果表明:L的粗提液加入到质量浓度25%PEG800与质量浓度12%PEGNH4)OH=9的环境下,2S4形成的双水相体系中进行分离萃取,总黄酮在上、下相的分配系数和萃取率达到最高。从而确定了本实验方法对于萃取分离山楂中的总黄酮是有效的。
关键词:双水相系统;山楂总黄酮;紫外分光光度法
0 引言
黄酮类化合物在自然界中普遍存在,呈现弱酸性。在双子叶植物的叶、根、茎以及果实中大量存在。而山楂叶所含的活它们的极性不同,可根据相似相溶原理,性组分大多为黄酮苷,
用水、丙醇、正丁醇等提取。黄酮类化合物能使心肌的耗氧量在预防动脉硬化方面有良好的作用;同时黄酮化合物还减少,
能延缓人体衰老过程,增强人体免疫力,对人体的内分泌系统具有良好的调节作用;而且黄酮还具有防癌的作用,对一些冠状动脉心脏疾病相关的症状有一定的预防作用。因此这些化合物能够广泛应用在医药、保健食品添加剂和杀虫剂等领域,于是在国内外越来越成为人们研究的热点。
无毒、PEG是聚乙二醇英文名polethlenelcol的简称, yygy
无刺激性,具有良好的水溶性,并与许多有机物组分有良好的相溶性。
各组得到的吸光度A作为纵坐标,做出芦丁标准曲线为坐标,
,,/芦丁浓度在1~6μA=18.611C+0.0077r=0.9991mL范 g
围内,线性关系良好。1.4 双水相体系的配制
将一定量的聚乙二醇、硫酸铵、加入一部分3mL粗提液,//蒸馏水,用0.1molL的NaOH和0.1molL的HCl调节pH,。摇匀使两相充分混合,使双水相系统的总质量为1在离心0g机中离心,使之快速分相,5min后取出。用胶头滴管分别吸取下相溶液进行分析,分别测定上、下相体积,双水相中山楂上、
总黄酮的含量。
1.5 山楂中总黄酮含量的测定
取6个试管,标号1、向2号管中加入对照液2、3、4、5、6号,1.0mL、3号管中加入2.0mL、4号管中加入3.0mL、5号管中加入4.分别加入50mL、6号管中加入5.0mL,0%乙醇使成;精密加入5%N摇匀,放置6m加5mL;aNO.3mL,in2溶液0(;/入1摇匀,放置6m加入1m0%AlNO.3mL,inolL3)3溶液0用5混合均匀。NaOH溶液4mL;0%乙醇加到10mL处,
向1号管中加入5%N摇匀,放置aNO.3mL,2溶液0;(;加入1摇匀,放置6m加6min0%AlNO.3mL,in3)3溶液0/入1m用5混olLNaOH溶液4mL;0%乙醇定容到10mL处, 合均匀,作为对照溶液,在512nm波长处测定待测液的吸光度,代入标准方程,分析计算样品中总黄酮的含量。
1 实验
试剂与材料1.1 仪器、
、紫外分光光度计(龙尼柯有限公司)离心机(北京离心机、、厂)恒温水浴锅(上海仪器有限公司)干燥箱(江苏曙峰企、。业)分析天平(莱阳化工有限公司)
芦丁对照品(批号1购自中国食品药品检00080-200707)山楂购自国药控股福建有限公司中药部。定研究院,
所有试剂均为分析纯。1.2 山楂粗提液的制备
,准确称取山楂碎末5g放到烧杯中,向烧杯中加入60%乙,醇1混合5m然后将溶液转移至220mL,in50mL容量瓶中,补加蒸馏水至刻度,摇匀,充分混合,静置4h后,减压过滤得到暗红色的山楂粗提液。1.3 芦丁标准溶液的配制
用分析天平称取5m加6定容到0%乙醇溶解,g芦丁,/得到5100mL,0μmL的芦丁标准品溶液。g
取6只容量瓶,标号1、用移液管移取0m2、3、4、5、6号,L芦丁标准品加入到1号容量瓶中,然后加入5%NaNO2溶液(0.7mL混合均匀,5min后再加入10%AlNO0.7mL,3)3溶液混合均匀,过5m向混合液中加入5%Nin之后,aOH溶液
然后用3混合均匀。分别向2号加入0.7mL,0%乙醇定容,1mL、3号加入2mL、4号加入3mL、5号加入4mL、6号加入其他步骤与前面一致,静置15mL芦丁标准品,0min左右在
以1号容量瓶中的溶液作512nm处测定芦丁标准品的吸光值,分别测量各组的吸光度,把芦丁标准品浓度作为横为空白对照,
2 结果与分析
/(2.1 PEGNH4)SO24双水相体系相图
将用浊点法计算出来的PEG800、1000、2000的质量浓度和(得到PNH4)SOEG24质量浓度在一个坐标系中作出相图,的平均分子量不同,相图中双接线位置与形状也不同,PEG分子量增大,曲线越接近坐标轴。
2.2 PEG平均分子量对双水相体系的影响以相图为依据,选择质量浓度20%的PEG800和质量浓度分析计算山楂中黄酮的分配系数K和20%的(NH4)SO24混合,然后继续改变P使硫酸铵的质量浓度不萃取率,EG的分子量,变,分别测定在PEG1000和PEG2000的情况下黄酮的萃取结果,实验结果如表1所示。从表1可以看出,黄酮在双水相中这可能是因为当的分配系数和萃取率和PEG的变化成反比,上、下两相界面间的张力变大,从而影响了PEG分子量变大时,传质效率,导致分配系数和萃取率减小。PEG平均分子量越低,水溶性越好,K值和萃取率在PEG800时达到最大。根据相似相溶原理,山楂中可能含亲水性的黄酮类化合物较多.
把红山楂中的黄酮类化合物进行提取、分离和纯化,并对黄酮类化合物的成分进行分析。该研究对于山楂资源的深加工利用和山楂中药的药理研究具有重要的指导意义和应用价值。 采用微波提取、超临界萃取和快速溶剂萃取方法,研究了山楂中的黄酮类化合物提取工艺。首先进行单因素试验,并在此基础上选取合适水平设计了正交试验,确定最优提取工艺条件。快速溶剂萃取法最优条件为:提取温度80℃,提取时间5min,循环次数3次,乙醇浓度50%,在该条件下山楂黄酮提取率为4.99%。微波提取法最优条件为:料液比1:30,乙醇浓度70%,提取时间1.5min,微波功率320W,提取率为3.64%。超临界提取法最优条件为:提取温度45℃,提取压强25MPa,夹带剂用量为每10g原料加入20ml浓度为70%的乙醇,提取时间90min,提取率为3.80%。 分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取山楂提取物,利用硅胶柱分离乙酸乙酯层萃取物,分离所得组分利用GC-MS和LC-MS进行分析,气质分析检测到20种物质,其中11种物质首次在山楂中发现;液质分析检测到129种物质,其中29种物质首次在山楂中检测到。共鉴定出12种黄酮类物质,其中5种首次在山楂中发现。
不同生长期山楂叶中黄酮类化合物的含量测定
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2022-12-03 10:29:09【
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