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山楂中黄酮类化合物的方法测定叙述(二)
山楂中黄酮类化合物的方法测定叙述
1,2
,张守勤,窦建鹏,奚玉石
111
(1.吉林大学生物与农业工程学院,吉林长春130022;
2.吉林省经济管理干部学院,吉林长春130021)
摘要:目的测定并比较不同生长期山楂叶中黄酮类化合物含量的差异。方法采用分光光度法和高效液相色谱法检测
黄酮类化合物的含量。结果在不同的生长期,山楂叶中总黄酮和牡荆素鼠李糖苷的含量都在8月份最高,然后逐渐降
低。结论以提取黄酮类化合物为目的的山楂叶最适宜在8月份采收。
关键词:山楂叶;黄酮类化合物;高效液相色谱法;超高压提取中图分类号:TQ914.1;R284.2文献标识码:A文章编号:10080805(2007)04077302
ContentDeterminationofFlavonoidsfromHawthornLeavesatDifferentGrowthTime
111
,ZHANGShouqin,DOUJianpeng,XIYushi
(1.CollegeofBiologicalandAgriculturalEngineering,JilinUniversity,Changchun130022,China;2.JilinProvincialEconomicManagementCadreCollege,China)
.MethodsThecontentsAbstract:ObjectiveTocomparethecontentsofflavonoidsinHawthornleavesofdifferentgrowthstages
LIHongwei
1,2
offlavonoidsweredeterminedbyUVspectrophotometryandHPLC.ResultsAtdifferentgrowthstages,thecontentsoftotalfla
vonoidsand2ORhamnosylvitexinwerethehighestinAugust;afterwards,thecontentofflavonoidsdecreased.ConclusionAugustwasappropriatetimeinordertoobtainflavonoidscomponentsfromHawthornleaves.
Keywords:Hawthornleaves;Flavonoids;HPLC;Highhydrostaticpressureextraction
山楂叶为蔷薇科植物山里红CrataeguspinnatifidaBge.Var.MajorN.E.Br.或山楂CrataeguspinnatifidaBge.的干燥叶,山楂叶中所含的黄酮类成分具有降压、强心等多种药理活性,尤其对缺血性心肌损伤有明显的保护作用[1,2]。为了更合理地综合开发利用山楂叶和确定最佳采收期,本文对不同生长期的山楂叶中的总黄酮和牡荆素鼠李糖苷分别进行了含量比较分析。对山楂叶中黄酮类成分进行提取,常用的方法主要有乙醇回流法[3,4]和酶法[5,6]。这些方法存在提取时间长、提取液中杂质多(如无机盐、蛋白质、糖等)、分离困难、能耗高、热敏性化合物易发生变性
[7,8]
等不足。而超高压提取技术是一种新兴的天然药物有效成分提取技术,它是利用100mPa以上的流体静压力作用于料液上,经过短时间提取后迅速卸压,然后再进行分离纯化的一种提取技术。本实验将超高压提取技术应用于山楂叶黄酮提取,大大缩短了样品的制备时间。1仪器与材料
DL700超高压等静压机(上海大隆机器厂),日本岛津LC20A高效液相色谱仪,UV-2450紫外可见分光光度计,MV110电子天平(上海天平仪器厂)。
山楂叶采于吉林省吉林市昌邑区土城子乡,经鉴别为CrataeguspinnatifidaBge.var.MajorN.E.Br;牡荆素鼠李糖苷(MPbiomedicals);芦丁对照品(中国药品与生物制品检定所);冰醋酸为色谱纯;乙醇为分析纯。2方法与结果
2.1总黄酮含量测定2.1.1对照品溶液的制备精密称取在干燥至恒重的芦丁对照品10mg,用50%乙醇定容至50ml容量瓶中,即得对照品溶液。2.1.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液1,2,3,4,5,6
收稿日期:20060818;修订日期:20061128
基金项目:国家自然科学基金资助项目(NO.30472135)
作者简介:李宏伟(1961),男(汉族),吉林长春人,现任吉林经济管理干部学院教授,吉林大学生物与农业工程学院在读博士研究生,学士学位,主要从事天然药物有效成分提取研究工作.
m,l分别置25ml量瓶中,各加水至6m,l加5%亚硝酸钠溶液1m,l摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液1m,l摇匀,放置6min,加4%氢氧化钠溶液10m,l再加水至刻度,摇匀,放置15min,以相应试剂为空白,立即用分光光度法,在500nm的波长处测吸光度(A),以吸光度为纵坐标,质量浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线。回归方程为:C=0.077A,r=0.9998。
2.1.3供试品溶液的制备精密称取山木楂叶粉末0.5g,准确加入50%乙醇25m,l混匀,压力为400mPa,提取时间为3min,过滤,取续滤液,即得供试品溶液。
2.1.4样品测定精密量取上述待测液1ml于25ml容量瓶中,加水至6m,l加5%亚硝酸钠溶液1m,l摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液1m,l摇匀,放置6min,加4%氢氧化钠溶液10m,l再加水至刻度,摇匀,放置15min,以相应试剂为空白,立即按照紫外-可见分光光度法,在500nm的波长处测吸光度值(A),按照回归方程计算含量。结果见表1。
表1样品中总黄酮测定结果
采集时间
5月20日7月1日8月1日9月1日10月20日n=3
总黄酮5.587.0010.398.601.86
RSD1.121.971.411.561.08
%
2.2牡荆素鼠李糖苷的含量测定
2.2.1色谱条件RP-C18色谱柱250mm4.6mm(5m);流动相以A:乙腈,B:0.5%乙酸水溶液梯度洗脱,起始时,A:20%,20min,A:20%,20.01min,A:28%,40min,A:40%;检测波长为340nm;流速0.8ml/min。
2.2.2对照品溶液的制备精密称取在干燥至恒重的牡荆素鼠李糖苷对照品3.0mg,用50%乙醇定容至10ml容量瓶中,即得对照品溶液。
2.2.3线性关系考察精密吸取牡荆素鼠李糖对照品溶液2,4,6,8,10l进样,绘制标准曲线,回归方程为Y=910-7X-
1
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