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山楂中黄酮类化合物的测定方法概述(二)
山楂中黄酮类化合物的测定方法概述
称取1~2g经预处理的聚酰胺树脂粉末,湿法装柱,用水饱和。吸取上述脱脂后的水溶液1~2ml,沿层析柱漫漫滴人柱内,放置一定时间,待测液被充分吸附后,用70%乙醇或甲醇洗脱,流速为1.0ml/min,至流出液基本无色,一般收集10ml即可。上述洗出液用洗脱剂定容后即可用于测定。
液体样品:准确吸取1.0ml样品,定容至50ml后,直接以75ml 氯仿分3次萃取脱脂,其余步骤同上。
标准曲线的绘制:准确吸取芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、⒋00ml(相当于芦丁0、75、150、300、450、600ug),移入10ml刻度比色管中,加入30%乙醇溶液至5ml,各加5%亚硝酸钠溶液0.3ml,振摇后放置5min,加入10%硝酸铝溶液0.3ml摇匀后放置6min,加1.0mol/L氢氧化钠溶液2ml,用30%乙醇定容至刻度。摇匀,放置15min,于510nm波长处测定吸光度,以零管为空白,以芦丁含量(ug)为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线,计算相关系数(r)。
样品测定:根据样品中总黄酮含量高低,取适宜体积待测液,按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度的测定(样液如有沉淀,应过滤后测定)。
④结果计算:根据标准工作曲线,求出相当于样品吸光度的芦丁含量,按下式求出总黄酮含量
3.毛细管电泳法
毛细管电泳法是离子或荷电粒子以电场为驱动力, 在毛细管中按其淌度或分配系数不同进行高效、快速的电泳分离新技术。常用的方法主要有毛细管区带电泳(CZE)、胶束电动力
学毛细管色谱(MEKC)、毛细管凝胶电泳( CGE) 、毛细管等速电泳(CITP)等。它的各种操作模式特别是CZE和MEKC都能很好的用于中药成分含量分析。
4.其他
共振散射光谱法、单扫示波极谱法、近红外漫反射光谱法(对已知总黄酮含量的样品在1100 ~2500 nm 处扫描建立样本数据库, 对预测集样品进行分析,结果预测值与HPLC真值的相关系数(r)为0.973,结果准确且提高了检测效率)、流动注射法-化学发光,电化学法,免疫化学发光,这些检测灵敏度高的分析方法也将逐步应用于总黄酮的含量测定。
三.试验结果
(一)不同的测定方法有不同的特点
对山楂叶中的黄酮类化合物进行HPLC分析多以金丝桃苷和以牡荆素为标准品,但牡荆素鼠李糖苷为山楂的专属性成分。因此本实验以牡荆素鼠李糖苷为标准品进行了山楂叶中黄酮类化合物的HPLC分析。在实验过程中发现此流动相体系的选择比较困难。经过反复摸索选择了前文的流动相配比分离效果较好在此条件下牡荆素鼠李糖苷与山楂中其它成分达到较好的分离。
在提取山楂叶中的黄酮类有效成分时比较了传统工艺和超高压提取工艺超高压提取方法的优点是提取速度快、杂质少、收率因此采用了超高压提取技术进行了黄酮类化合物的提取然后采用HPLC进行检测大大缩实验结果表明山楂叶中的总黄酮和牡荆素鼠李糖苷的含量既不是花期最高也不是秋季摘果后最高。而是从花期5月下旬开始逐渐增高到8月份达到最高。然后随着果实的成熟含量逐渐下降到落叶时10下旬含量最低。因此如果以提取山楂叶中的黄酮类化合物为目的应该选择8月初的山楂叶。此时的总黄酮和牡荆素鼠李糖苷含量都是最高为合理的采收和利用提供了理论依据。为充分利用有限的中药资源应该选择最佳的采收期从而提高中药的利用价值。
参考文献:
【1】、陈丛瑾,屈丽娟,陈东,双水相萃取法风、离纯化黄酮类化合物的研究进展【J】。应用化工,201039(10):1587-1589.
【2.】张妍,李厚伟。孙建平等,山楂果总黄酮的提取分离及体外抗肿瘤活性【J】中草药,200435(7):787-789.
【3】伍胶,胡艳颖,曹发正等。山楂黄酮对微波辐射大鼠抗氧化作用的研究【J】吉林医药学院学报,2012(6):371-372.
【4】汪晓鸣刘超,曹磊等,山楂黄酮提取物对辐照肉糜脂肪氧化的抑制力【J】核农学报,2011,25(3):0514-1517.
【5】金宁,刘通讯,山楂原花青素的抗氧化活性研究【J】.食品与发酵工业2007,33(1):45-47.
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