人工牛黄及其制剂中胆酸含量测定的研究进展(三)

张兰珍等人研究了牛黄制剂中cA提取溶剂、提取方法、净化方法及薄层色谱条件。认为乙酸乙酯为首选提取溶剂，直接超声提取为最佳提取方法。并且对15种制剂的净化方法进行了实验考查，认为样品用乙酸乙酯超声提取30rain，滤液用5％NaHCO，萃取5～8次，萃取液用6NHCI酸化至pH=2～3，再用乙酸乙酯萃取5—8次，为最佳净化方法。展开系统以环己烷-乙酸乙酯一冰醋酸(4：4：1)或异辛烷一乙酸乙酯-冰醋酸(15：7：5)为最佳，5％磷钼酸乙醇液为显色剂，测定波长b=680rim。均可获得较理想结果。由于CA与硫酸反应可牛成具有共轭结构，有紫外吸收特征的化合物，因此苟雅书等测定了蒙成药海鲁木勒-9中胆酸的含量，展开剂为异辛烷．乙酸乙酯-冰醋酸(5：5：1)，以10％硫酸乙醇溶液，加热显色(1100c)。入s= 380nm，入R=600nm，该法平均回收率为97．64％，RSD为2．12％。杨洪武等应用薄层扫描反射锯齿法测定人工牛黄及其制剂中胆酸的含量，k=380nm。狭缝：0．4nm X 0．4nm，Sx=3，以正己烷．乙酸乙酯一醋酸-甲醇(20：25：2：3)的上层溶液为展开剂，10％硫酸乙醇溶液加热显色，侯惠蝉等应用该方法测定猴枣牛黄散中胆酸的含量，结果精密度、重现性、稳定性和回收率均良好。巴根那等应用相同展开剂在入s=375nm，入R=385nm狭缝1．20ram X1．2ram；Sx=3条件下测定蒙成药西红花十六味散中胆酸含量，也得到较满意结果。

4．3高效液相色谱法(HPLC)

HPLC法分辨率高，数据处理快，且灵敏度高，对于复方制剂的含量测定是较好的方法之一。由于胆酸结构中缺乏共轭结构，无紫外吸收特征，因此用HPLC紫外或荧光法检测时必须将胆酸衍生化，带上强紫外吸收基团或荧光生色基团，才能使用高灵敏度的紫外检测器或荧光检测器。

倪坤仪等采用反相法测定了牛黄类中成药中CA含量。方法是以溴乙酰基对硝基苯为衍生化试剂，醚为催化剂，苯丙酸诺龙为内标，色谱柱选用uBondapak—C18柱(8—101山m，3．9mm X 300mm)，或Novapak C18柱(5斗m，2ram X 150n．1In)，前面加Ross C18Guard-pak预柱为保护色谱柱，流动相采用甲醇-乙腈-水(24：35：41)，入=254nm，分离测定了牛黄及其制剂六神丸、六应丸和牛黄消炎丸中胆酸的含量，均获得较满意的结果。范广平等陋1采用反相高效液相色谱法，不经化学衍生，以甲醇-水(75：25)为流动相，k=210hm，对牛黄的甲醇提取液直接进行进样分析，一次进样即能分离游离型CA、DCA、CDCA (鹅去氧胆酸)及结合型甘氨胆酸(GCA)。方法简便易行，其中CA回收率为96．6％，RSD为2．67％(凡=5)。冯芳等Ⅲ1用反相高效液相色谱．蒸发光散射检测法同时测定人工牛黄中多组分含量，采用Waters  Nova—Pak  C18色谱柱(5斗m，4．6mm X250mm)，流动相：甲醇·水-冰醋酸(80：20：0．01)，ELSD参数：漂移管温度105c12，雾化气体(N：)，该法分析简便、准确。李文春等悼刊采用反相高效液相法测定青羚散中胆酸的含量，采用Hypersil BDS C18色谱柱(250nun×4．6mm，5恤m)；以甲醇．1％醋酸溶液(77：23)为流动相，采用蒸发光散射检测器(ELSD)对朋酸直接进行定量分析，获得了较理想的结果。袁红宇等人采用上述方法建立超细珠黄凝胶中活性成分胆酸的含量测定，结果样品浓度在90．2—902．0g·mL“范围内，线性关系良好，r=0．999 9；平均回收率为100．5％，RSD为2．5％[16]。

4.4毛细管电泳法

郑建新等m1建立以毛细管电泳法测定人工牛黄中胆酸含量的方法，结果胆酸检测浓度在60．6— 970．0p,g·mL“范围内线性关系良好(r=0．998 0)，平均回收率为98％一102％(RSD<5％)该方法简捷、快速、准确、重现性好，可用于该药材的质量控制。

5.小结

综上所述，近年来测定CA含量的主要方法有UV．V Is、TLCS、HPLC等，以上诸法各有优缺点，UV法较简便，所用仪器，试剂均较普遍，多用于人工牛黄药材和小复方药物的检测，具有干扰小，灵敏度高，操作简便等特点。但对于含CA多组分复杂的中成药的测定，处理样品繁琐，测定时干扰组分多，给测定带来一定影响。TICS法操作简便，能分离多种组分，但对薄层色谱条件要求较高，影响因素较多，仍需进一步简化操作。HPLC法分离效率高，速度快，灵敏度高，分析结果准确，近年来逐渐得到广泛应用。但由于胆酸结构中不含生色基团，因此使用高效液相色谱常用检测器(如紫外、荧光检测器)测定其含量时，需在短波末端(。<210nm)进行，灵敏度低，而且一些微量强吸收杂质和溶剂会产生干扰，影响色谱峰的分离。蒸发光散射检测(ELSD)是一种新型质量型检测器，其测定原理是基于不挥发样品分子对光的散射程度与其质量成正比，与其所含基团性质无关。主要应用于没有紫外或为紫外末端弱吸收的样品。因此采用ELSD．HPLC联用测定且H酸含量具有操作简便、分析结果准确等优点，但仪器价格昂贵，尚未广泛应用。近年来兴起的毛细管电泳法也是CA含量测定的方法之一。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部．部颁标准[S]．WSI．02(D一02)88 

[2]刘珊珊，崔艳萍，谭新保．人工牛黄中胆酸糠醛比色测定法的改进[J]．中国医药工业杂志，1994，25(1)：20

[3]石海琳，唐继德．周新建，等．人工牛黄中胆酸含量测定方法的改进[J]．中成药．1995，17(5)：128 

[4]运委，陈晓勤．感冒通片中人工牛黄测定方法的研究[J]．药物分析杂志．1994，14(2)：53

[5]王维礼，唐秀忠．糠醛溶液的活性炭脱色测定药品中胆酸的含量[J]．中成药，1994，16(3)：15 

[6]郁子萱，孟兰．人工牛黄成品中胆酸含量测定探讨[J]．中国药业，2001，10(3)：27 

[7]辛勋，陆红云．紫外分光光度法测定速效伤风胶囊中胆酸的含量[J]．中国药业．2000，9(1)：3

[8]李素霞，刘英．感冒通片中人工牛黄的含量测定[J]．时珍国医国药，2001，12(5)：403

[9]胡德福，陈长清．一阶导数光谱法测定感冒通片中人工牛黄的含量[J]．药物分析杂志，1991，11(3)：175

[10]周雪梅，林言，郝美玲．一阶导数光谱法测定蒙成药图喜木勒-3中人工牛黄胆酸的含量[J]．中成药，1997，19(11)：15

[11]曾俐蜂，薛钜枢．人工牛黄及复方制剂中胆酸的二阶导数分光光度测定[J]．中国医药工业杂志。1995，25(10)：455

[12]郝美玲．乌云娜．2种蒙成药中胆酸的薄层扫描含量测定[J]．中国中药杂志．1996。21(9)：546

[13]巴俊杰．苟雅书，郭晓宇．薄层扫描法测定蒙药三臣丸中胆酸的含量[J]．中国民族医药杂志，2001。8(1)：39

[14]孙田喜，莫13根高娃，哈斯高娃．薄层扫描法测定蒙成药三臣丸中胆酸的含量[J]．内蒙古民族大学学报(自然科学版)，2003，18(3)：229

[15]刘长河，郭荣华．柴胡退热口服液中胆酸的含量测定[J]．中医药研究，1999，2：37

[16]郑建新。邹登峰．毛细管电泳法测定人工牛黄中胆酸的含量[J]．中国药房，2006，17(23)：1817